微小rna抑制剂的制作方法

来自 : www.xjishu.com/zhuanli/05/2013 发布时间：2021-03-24

微小rna抑制剂的制作方法
【专利摘要】提供一种微小RNA抑制剂，其具有广泛的实用性且难以降解。微小RNA抑制剂1的特征在于，其具有与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序列2，和两个以上的互补序列2经一个(或多个)连接子残基3彼此连接。
【专利说明】微小RNA抑制剂

【技术领域】
[0001] 本发明涉及微小RNA(microRNA)抑制剂。

【背景技术】
[0002] 微小RNA为18_25mer的小RNA，其由基因组转录并调控靶基因的表达。已知微 小RNA的异常表达深度介入许多疾病如癌症等中，且近年来已极力进行了将微小RNA作为 诊断和治疗的靶标的研究。抑制微小RNA的方法包括使用LNA(锁核酸，LockedNucleic Acid)的方法，且该方法在欧洲和美国处于临床阶段。作为微小RNA的其它抑制方法，存在 称为微小RNASponge(海绵）的技术（非专利文献1)。
[0003][文献列表]
[0004][非专利文献]
[0005]非专利文献1 :NATURE METHODS, 4:72


【发明内容】

[0006] 发明要解决的问是页
[0007] 然而，由于使用LNA的方法需要使用特定的修饰核酸，因而其缺乏广泛的实用性。 此外，尽管微小RNA海绵具有广泛的实用性，但其还具有的问题在于RNA分子容易被降解酶 降解。
[0008] 因此，本发明旨在提供一种具有广泛的实用性且难以降解的微小RNA抑制剂。
[0009] 用于解决问题的方案
[0010] 为了实现前述目的，本发明的微小RNA抑制剂的特征在于其具有与为抑制靶标的 微小RNA的序列互补的两个以上的序列，且前述两个以上的互补序列经连接子残基连接。
[0011] 发明的效果
[0012] 由于本发明的微小RNA抑制剂不需要使用特定的修饰核酸，因而其在广泛的实用 性方面占优，且由于前述互补序列经连接子残基连接而难以降解。

【专利附图】
【附图说明】
[0013] 图1示出本发明微小RNA抑制剂的示例性组成。
[0014] 图2示出本发明微小RNA抑制剂的示例性序列。
[0015] 图3示意性示出错配序列的实例。
[0016] 图4示出实施例1的微小RNA的表达水平通过qPCR的确认结果。
[0017] 图5为海肾突光素（Renillaluciferase)基因通过用于实施例的质粒表达的示 意图。
[0018] 图6为萤火虫突光素（fireflyluciferase)基因通过用于实施例的不同质粒表达 的示意图。
[0019] 图7为示出实施例2-1的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。
[0020] 图8为示出实施例2-2的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。
[0021] 图9为示出实施例2-3的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。
[0022] 图10为示出实施例3的微小RNA抑制剂的miR-16活性抑制效果的图。
[0023] 图11为示出实施例4中使用HCT116细胞比较Gly型海绵低聚体（spongeoligo) (微小RNA抑制剂）和GlyGly型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果 的图。
[0024] 图12为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体（sponge oligo)(微小RNA抑制剂）和TPA型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效 果的图。
[0025] 图13为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体（sponge oligo)(微小RNA抑制剂）和TPA型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效 果的另一图。
[0026] 图14也为示出实施例4中使用HCT116细胞比较GlyGly型海绵低聚体（sponge oligo)(微小RNA抑制剂）和TPA型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效 果的另一图。
[0027] 图15为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体（spongeoligo) (微小RNA抑制剂）和GlyGly型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果 的图。
[0028] 图16为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体（spongeoligo) (微小RNA抑制剂）和GlyGly型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果 的另一图。
[0029] 图17为示出实施例4中使用HEK293T细胞比较Gly型海绵低聚体（spongeoligo) (微小RNA抑制剂）和GlyGly型海绵低聚体（微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果 的另一图。
[0030] 图18为示出实施例5中使用HCT116细胞比较当miR-16结合序列为完美型 (Perfecttype)、泡型（Bubbletype)或凸型（Bulgetype)时的海绵低聚体（sponge oligo)(微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果的图。
[0031] 图19为示出实施例5中使用HEK293T细胞比较当miR-16结合序列为完美型、泡 型和凸型时的海绵低聚体（spongeoligo)(微小RNA抑制剂）的miR-16活性抑制效果的 图。

【具体实施方式】
[0032] 下面参考实施例详细解释本发明。然而，本发明不受下列说明的限定。
[0033] 本发明的微小RNA抑制剂优选具有键合至存在于微小RNA抑制剂两末端的前述互 补序列的各端部的连接子残基。以该形式，可进一步抑制降解。
[0034] 在本发明的微小RNA抑制剂中，前述连接子残基优选包含选自由氨基酸残基、聚 酰胺残基和多元羧酸残基组成的组的至少之一。前述连接子残基可包含或可不包含除氨基 酸残基、聚酰胺残基和多元羧酸残基以外的残基。例如，前述连接子残基可为多元羧酸残 基、对苯二甲酸残基和氨基酸残基中任一。
[0035] 本发明中，\"聚酰胺\"意指包含多个（两个、三个或更多）氨基的任意化合物。前 述\"氨基\"不限于_NH2基团，还包括亚氨基（-NH-)。本发明中，前述聚酰胺不特别限定，其 实例包括1，4-苯二胺、1，3-苯二胺和1，2-苯二胺等。此外，在本发明中，\"多元羧酸\"意指 包含多个（两个、三个或更多）羧基的任意化合物。本发明中，前述多元羧酸不特别限定， 其实例包括1，4-二羧基苯（对苯二甲酸）、1，3-二羧基苯（间苯二甲酸）和1，2-二羧基 苯（邻苯二甲酸）。另外，本发明中，\"氨基酸\"意指如下所述分子中包含一个以上的氨基和 一个以上的羧基的任意有机化合物。前述\"氨基\"不限于_NH2基团，还包括亚氨基（-NH-)。
[0036] 在本发明的微小RNA抑制剂中，存在于前述两个以上的互补序列之间的氨基酸残 基可为多个互连的氨基酸残基。本发明中，为多个互连的氨基酸残基的氨基酸残基为例如 包含肽结构的残基。更具体地，为多个互连的氨基酸残基的前述氨基酸残基为例如下述化 学式（I)的氨基酸残基，其中下述化学式（la)为肽（例如，甘氨酸二聚体或甘氨酸三聚体 等）。
[0037] 在本发明的微小RNA抑制剂中，前述氨基酸残基可为甘氨酸残基、对苯二甲酰胺 残基或脯氨酸残基。
[0038] 在本发明的微小RNA抑制剂中，键合至前述互补序列的端部的氨基酸残基可为多 个互连的氨基酸残基。另外，在本发明的微小RNA抑制剂中，存在于两个以上的互补序列之 间的前述氨基酸残基和键合至前述互补序列的端部的氨基酸残基的至少之一可为甘氨酸 二聚体或三聚体的残基。
[0039] 本发明中，前述互补序列可为RNA或DNA。
[0040] 本发明中，连接前述两个以上的互补序列的氨基酸残基不特别限定，如上所述可 使用例如甘氨酸残基、对苯二甲酰胺残基或脯氨酸残基。另外，前述氨基酸残基可为修饰的 氨基酸残基或氨基酸衍生物。连接（结合）前述两个以上的互补序列的氨基酸残基可为单 一氨基酸残基或彼此连接的两个以上的氨基酸残基。
[0041] 本发明中，如上所述，存在于微小RNA抑制剂的两末端的前述互补序列优选具有 前述连接至各端部的连接子残基。前述连接子残基可为例如氨基酸残基。在前述氨基酸残 基不特别限定的同时，其为例如甘氨酸残基、对苯二甲酰胺残基或脯氨酸残基。连接前述两 个以上的互补序列的氨基酸残基可为单一氨基酸残基或两个以上的氨基酸残基。
[0042] 本发明中，前述互补序列与为抑制靶标的微小RNA全部或部分互补。当序列部分 互补时，优选其与从微小RNA环的3\'侧或5\'侧的序列互补。前述互补序列可包含与微小 RNA的环部分全部或部分互补的序列。前述互补序列的数目为两个以上，例如2-10、优选 3-8、更优选4-6。在前述互补序列的碱基数不特别限定的同时，其可为例如约20-25个碱 基。前述互补序列可如上所述为RNA或DNA，或可为DNA和RNA的混合物。构成前述互补序 列的核酸优选为天然核酸。然而，本发明不限于此，且可为例如修饰核酸。另外，构成前述 互补序列的核酸可为例如人工核酸如LNA(BNA)和PNA等。从广泛的实用性和便利的方面， 如上所述优选天然核酸。
[0043] 本发明微小RNA抑制剂的构成的实例示于图1。如该图所示，在该实例的微小RNA 抑制剂1中，三个互补序列2经两个连接子残基（如氨基酸残基）3连接，连接子残基3还连 接至互补序列2两端的各端部。另外，本发明微小RNA抑制剂的序列的实例在hsa-miR-15a 作为微小RNA为抑制靶标时示于图2。在该实例中，前述互补序列（SEQIDN0:1)与 hsa_miR-15a的全长序列互补。
[0044] 5,-CACAAACCATGCCTGCTGCTA-3\'（SEQIDN0:1)
[0045] 在本发明的微小RNA抑制剂中，前述互补序列可与例如微小RNA全部或部分完全 互补（完全匹配），或可包含错配。当本发明的微小RNA抑制剂包含错配时，由裂解双链核 酸的酶（Dicer等）的裂解受到抑制，并且降解优选变得更加困难。前述错配不特别限定。 例如，1个碱基至几个碱基的错配可存在于前述互补序列的中心部分，或前述互补序列的中 心部分可为凸（Bulge)(除靶序列的互补序列以外，中心部分中包含1个碱基至几个碱基的 额外序列[例如，约4个碱基])。前述互补序列的前述\"中心部分\"不特别限定，只要其不 同于前述互补序列的末端的碱基即可。图3示意性示出错配的实例以及完全匹配的实例。 图3(a)为示出完全匹配的实例的示意图，图3(b)为示出前述凸的实例的示意图，图3(c) 为示出前述互补序列在其中心部分具有1个碱基至几个碱基的错配的实例的示意图。在图 3(a)-(c)各图中，下侧的白色链示出靶序列（全部或部分微小RNA)，上侧的黑色链示出前 述互补序列。图3 (b)和（c)(特别是图3 (c))的错配的实例有时指凸型等。可选地，图3 (a) 的完全匹配的实例有时指完美型，图3(b)的实例有时指凸型，图3(c)的实例有时指泡型。
[0046] 本发明微小RNA抑制剂可通过例如如下所示的化学合成来制造。
[0047] 前述化学合成方法不特别限定，其实例包括亚磷酰胺法和H-磷酸酯（盐）法等。 在前述化学合成法中，例如，可使用商购可得的自动核酸合成仪。在前述化学合成法中，例 如，可使用亚酰胺（amidite)。前述亚酰胺不特别限定，且商购可得的亚酰胺的实例包括 RNA亚磷酰胺（2, -〇-TBDMSi，商品名，SamchullyPharmCo.，Ltd.)、ACE亚酰胺、T0M亚酰 胺、CEE亚酰胺、CEM亚酰胺和TEM亚酰胺等。本发明的微小RNA抑制剂优选用于例如前述 氨基酸残基合成中的本发明的下述单体。
[0048] 在本发明的微小RNA抑制剂中，前述连接子残基由例如下列化学式（1-0)表示
[0049]

【权利要求】
1. 一种微小RNA抑制剂，其包括与为抑制靶标的微小RNA的序列互补的两个以上的序 列，其中所述两个以上的互补序列经一个或多个连接子残基连接。
2. 根据权利要求1所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残基键合至存在于所述微 小RNA抑制剂的两末端处的所述互补序列的各端部。
3. 根据权利要求1或2所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残基包括选自由氨基 酸残基、聚酰胺残基和多元羧酸残基组成的组的至少之一。
4. 根据权利要求1至3任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残基为多元羧 酸残基。
5. 根据权利要求3或4所述的微小RNA抑制剂，其中所述多元羧酸残基为对苯二甲酸 残基。
6. 根据权利要求1至3任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残基为氨基酸 残基。
7. 根据权利要求3或6所述的微小RNA抑制剂，其中所述氨基酸残基为一个或多个甘 氨酸残基、一个或多个对苯二甲酰胺残基或一个或多个脯氨酸残基。
8. 根据权利要求3、6和7任一项所述的微小RNA抑制剂，其中存在于所述两个以上的 互补序列之间的所述氨基酸残基为多个互连的氨基酸残基。
9. 根据权利要求3、6至8任一项所述的微小RNA抑制剂，其中键合至所述互补序列的 端部的所述氨基酸残基为多个互连的氨基酸残基。
10. 根据权利要求8或9所述的微小RNA抑制剂，其中存在于所述两个以上的互补序列 之间的所述氨基酸残基与键合至所述互补序列的端部的氨基酸残基的至少之一为甘氨酸 二聚体或三聚体的残基。
11. 根据权利要求1至10任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残基由下列 化学式（I-O)表不：
在前述化学式（1-0)中， Q11和Q12各自独立地为单键、CH2(亚甲基）、NH(亚氨基）、C = 0(羰基）、C = S(硫代 羰基）、C = NH(亚氨基亚甲基）、0或S， Q1和Q2各自独立地为单键、CH2(亚甲基）、NH(亚氨基）、C = 0(羰基）、C = S(硫代 羰基）、C = NH(亚氨基亚甲基）、0或S， Y1和Y2各自独立地为单键、CH2、NH、O或S ; L1为具有η个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、ORa、 NH2、NHRa、NRaRb、SH 或 SRa 取代，或 L1为通过用氧原子取代前述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y1为ΝΗ、0或S时，L1中键合至Y1的原子为碳，L 1中键合至OR1的原子为碳， 且氧原子彼此不相邻； L2为具有m个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、0Re、 NH2、NHR。、NReRd、SH 或 SR。取代，或 L2为通过用氧原子取代所述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y2为ΝΗ、0或S时，L2中键合至Y2的原子为碳，L 2中键合至OR2的原子为碳， 且氧原子彼此不相邻； Ra、Rb、Re和Rd各自独立地为取代基或保护基； m为0至30范围内的整数； η为0至30范围内的整数； 与前述微小RNA的序列互补的序列经-OR1-或-OR2-键合至前述连接子残基， 当前述连接子残基存在于前述微小RNA的互补序列之间时，R1和R2可存在或可不存在， 且当它们存在时，R1和R2各自独立地为核苷酸残基或前述结构（I-O); 当前述连接子残基存在于在末端处存在的前述微小RNA的互补序列的端部时，R1和R2 各自独立地为Η、保护基或磷酸保护基；和 A为任意原子团。
12. 根据权利要求11所述的微小RNA抑制剂，其中化学式（I-O)中的Q11和Q12各自为 撰基。
13. 根据权利要求12所述的微小RNA抑制剂，其中化学式（I-O)中的Q1和Q2各自为 亚氨基。
14. 根据权利要求12或13所述的微小RNA抑制剂，其中下列化学式（Ια)的结构由下 列化学式（I α 2)表不：
在前述化学式（Ια 2)中， R1tltl为任意取代基，其可存在或可不存在，且当其存在时，其可单独或多个存在，且当其 多个存在时，它们可彼此相同或不同。
15. 根据权利要求14所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（Ια 2)的结构由下列化 学式（I α 3)表不：
16. 根据权利要求11所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（I-O)中的Q11和Q12各 自为亚氨基。
17. 根据权利要求16所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（I-O)中的Q1和Q2各 自为羰基。
18. 根据权利要求16或17所述的微小RNA抑制剂，其中下列化学式（Ιβ)的结构由下 列化学式（I β 2)表示：
在前述化学式（Ιβ 2)中， Ricitl为任意取代基，其可存在或可不存在，且当其存在时，其可单独或多个存在，且当其 多个存在时，它们可彼此相同或不同。
19. 根据权利要求18所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（Ιβ 2)的结构由下列化 学式（Ιβ 3)表示：
O
20. 根据权利要求1至3和6至10任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述连接子残 基包括氨基酸残基，且所述氨基酸残基由下列化学式（I)表示：
在前述化学式（I)中， X1和X2各自独立地为H2、0、S或NH ; Y1和Y2各自独立地为单键、CH2、NH、0或S ; L1为具有η个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、0Ra、 NH2、NHRa、NRaRb、SH 或 SRa 取代，或 L1为通过用氧原子取代所述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y1为ΝΗ、0或S时，L1中键合至Y1的原子为碳，L 1中键合至OR1的原子为碳， 且氧原子彼此不相邻； L2为具有m个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、0Re、 NH2、NHR。、NReRd、SH 或 SR。取代，或 L2为通过用氧原子取代前述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y2为ΝΗ、0或S时，L2中键合至Y2的原子为碳，L 2中键合至OR2的原子为碳， 且氧原子彼此不相邻； Ra、Rb、Re和Rd各自独立地为取代基或保护基； m为0至30范围内的整数； η为0至30范围内的整数； 与前述微小RNA的序列互补的序列经-OR1-或-OR2-各自键合至前述氨基酸残基， 当前述氨基酸残基存在于前述微小RNA的互补序列之间时，R1和R2可存在或可不存在， 且当它们存在时，R 1和R2各自独立地为核苷酸残基或前述结构（I); 当前述氨基酸残基存在于在末端处存在的前述微小RNA的互补序列的端部时，R1和R2 各自独立地为Η、保护基或磷酸保护基；和 A为任意原子团，下列化学式（Ia)为氨基酸或肽：
21. 根据权利要求1至3、6至10和20任一项所述的微小RNA抑制剂，其中在所述氨基 酸残基中的所述氨基酸为天然氨基酸和人工氨基酸的至少之一。
22. 根据权利要求21所述的微小RNA抑制剂，其中所述天然氨基酸为构成蛋白质的氨 基酸。
23. 根据权利要求1至3、6至10、20和21任一项所述的微小RNA抑制剂，其中在所 述氨基酸残基中的所述氨基酸为选自由甘氨酸、α -丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、 半胱氨酸、胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、甲硫氨 酸、甲基丙氨酸、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、缬氨酸、脯氨酸、4-羟脯氨酸、色氨酸、β -丙氨 酸、1-氨基-2-羧基环戊烷、氨基苯甲酸、氨基吡啶羧酸和由下列化学式（Ia2)表示的氨基 酸组成的组的至少之一，且任选地进一步具有取代基或保护基：
在所述化学式（Ia2)， R1tltl为任意取代基，其可存在或可不存在，且当其存在时，其可单独或多个存在，且当其 多个存在时，它们可彼此相同或不同。
24. 根据权利要求23所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（Ia2)的结构由下列化 学式（Ia3)表不：
25. 根据权利要求11或20所述的微小RNA抑制剂，其中所述化学式（I-O)或⑴的 结构为下列化学式（I-I)-(1-6)，和在下列化学式（1-1)-(1-6)中，η为0至30的整数，且 m为0至30的整数：
O
26. 根据权利要求25所述的微小RNA抑制剂，其中在所述化学式（I-I)中，η = 11且 m = 12〇
27. 根据权利要求25所述的微小RNA抑制剂，其中在所述化学式（1-4)中，η = 5且m =4。
28. 根据权利要求25所述的微小RNA抑制剂，其中在所述化学式（1-6)中，η = 4且m =4。
29. 根据权利要求1至28任一项所述的微小RNA抑制剂，其中所述互补序列为RNA或 DNA。
30. 根据权利要求1至29任一项所述的微小RNA抑制剂，其由下列SEQ ID NOs :2、4、 6、13和15至18中的任一来表示： 5\' -Gly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-Gly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-Gly-CGCCAATATTCGAT GCTGCTA-Gly-T-3, (SEQ ID NO:2) 5\' -GlyGly-CGCCAATATTTACGTGCTGCTA-GlyGly-CGCCAATATTTACGTGCTGCTA-GlyGly-CGC CAATATTTACGTGCTGCTA-GlyGly-T-3, (SEQ ID NO:4) 5\' -GlyGly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-GlyGly-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-GlyGly-CGCCA ATATTCGATGCTGCTA-GlyGly-T-3, (SEQ ID NO:6) 5\' -GlyGly-CGCCAAUAUUCGAUGCUGCUA-GlyGly-CGCCAAUAUUCGAUGCUGCUA-GlyGly-CGCCA AUAUUCGAUGCUGCUA-GlyGly-U-3, (SEQ ID NO:13) 5\' -TPA-CGCCAATATTTACGTGCTGCTA-TPA-CGCCAATATTTACGTGCTGCTA-TPA-CGCCAATATTTA CGTGCTGCTA-TPA-T-3\' （SEQ ID NO:15) 5\' -TPA-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-TPA-CGCCAATATTCGATGCTGCTA-TPA-CGCCAATATTCGAT GCTGCTA-TPA-T-3\' （SEQ ID NO:16) 5\' -TPA-CGCCAATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-TPA-CGCCAATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-TPA-CGCC AATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-TPA-T-3\' （SEQ ID NO:17) 5\' -GlyGly-CGCCAATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-GlyGly-CGCCAATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-Gl yGly-CGCCAATATTTAGTTCCGTGCTGCTA-GlyGly-T-3, (SEQ ID NO:18) 在由SEQ ID NO:2表示的序列中，Gly为由下列化学式（Gl)表示的原子团，且当没有 碱基键合至5\'末端时，氢原子（H)键合至5\'末端： (5，侧
在前述化学式（Gl)中，Gly为由下列化学式（Gly)表示的原子团，下列化学式（Gly)中 的末端的羰基碳键合至化学式（Gl)中的N原子，下列化学式（Gly)中的末端氮原子键合至 上述化学式（Gl)的羰基碳， (Gly) -HN-CH2-CO- 由SEQ ID N0:4、6、13或18示出的序列中的GlyGly为由下列化学式（G2)表示的原子 团，且当没有碱基键合至5\'末端时，氢原子（H)键合至5\'末端： (5，
在前述化学式（G2)中，GlyGly为由下列化学式（GlyGly)表示的原子团，下列化学式 (GlyGly)中的末端羰基碳键合至化学式（G2)中的N原子，下列化学式（GlyGly)中的末端 的氮原子键合至上述化学式（G2)中的羰基碳， (GlyGly) -HN-CH2-CO-HN-CH2-Co- 由SEQ ID NO: 15、16或17示出的序列中的TPA为由下列化学式（TPA)表示的原子团， 且当没有碱基键合至5\'末端时，氢原子（H)键合至5\'末端：
O
31. -种用于核酸分子合成的单体，其具有下列化学式（II)的结构：
在前述化学式（Π )中 X1和X2各自独立地为H2、0、S或NH ; Y1和Y2各自独立地为单键、CH2、NH、0或S ; R11和R21各自独立地为H、保护基或磷酸保护基； L1为具有η个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、0Ra、 NH2、NHRa、NRaRb、SH 或 SRa 取代，或 L1为通过用氧原子取代前述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y1为NH、0或S时，L1中键合至Y1的原子为碳，L 1中键合至OR11的原子为 碳，且氧原子彼此不相邻； L2为具有m个碳原子的亚烷基链，和亚烷基碳原子上的氢原子可被或可不被OH、0Re、 NH2、NHR。、NReRd、SH 或 SR。取代，或 L2为通过用氧原子取代前述亚烷基链上的至少一个碳原子获得的聚醚链， 条件是：当Y2为NH、0或S时，L2中键合至Y2的原子为碳，L 2中键合至OR21的原子为 碳，且氧原子彼此不相邻； Ra、Rb、Re和Rd各自独立地为取代基或保护基； m为0至30范围内的整数； η为0至30范围内的整数； A为由下列化学式（Al)或（Α2)表示的原子团：
在前述化学式（A2)中， Ricitl为任意取代基，其可存在或可不存在，且当其存在时，其可单独或多个存在，且当其 多个存在时，它们可彼此相同或不同。
32. 根据权利要求31所述的单体，其中所述化学式（A2)的结构为下列化学式（A2a):
33. 根据权利要求31所述的单体，其中所述化学式（II)的结构为下列化学式（11-4)、 (II-5)或（11-6)，和在下列化学式（11-4)、（II-5)或（II-6)中，η为O至30的整数和m 为0至30的整数：
34. 根据权利要求33所述的单体，其中，在所述化学式（II-4)中，n = 5且m = 4。
35. 根据权利要求33所述的单体，其中，在所述化学式（II-6)中，n = 4且m = 4。
36. 根据权利要求31至35任一项所述的单体，其中，在所述化学式（II)中，L1为前述 聚醚链和前述聚醚链为聚乙二醇。
37. 根据权利要求31至36任一项所述的单体，其中，在化学式（II)中，L1的碳数（η) 和L2的碳数（m)的总和（m+n)为O至30。
38. 根据权利要求31至37任一项所述的单体，其包括标记物质。
39. 根据权利要求31至38任一项所述的单体，其包括稳定同位素。
40. 根据权利要求31至39任一项所述的单体，其用于核酸的自动合成。
41. 一种核酸分子的制造方法，其包括使用根据权利要求31至40任一项所述的单体。
42. 根据权利要求41所述的制造方法，其中所述核酸分子为根据权利要求1至30任一 项所述的微小RNA抑制剂。
【文档编号】A61K48/00GK104271742SQ201380023624
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2013年3月4日 优先权日:2012年3月4日
【发明者】大木忠明, 白水久男, 铃木宽, 滨崎智洋, 水谷隆之 申请人:株式会社博纳克